开展无菌检查和微生物极限检查，首先要按照《药品检验所实验室质量管理规范》和《药品生产质量管理规范》的要求，建立布局合理、使用方便、操作安全的无菌室，并配备完善的实验设施和管理体系。无菌检查、微生物极限检查和疫苗接种室(疫苗接种对照菌)应严格分离，危险毒株、破伤风梭菌、黄曲霉毒素等毒素应单独使用，以控制和防止传播。

　　(一)洁净实验室。

　　1.洁净室布局。

　　根据样品检验要求，至少应包括更衣缓冲系统、微生物极限检查室、无菌检查室、阳性菌室和物流通道。

　　更衣系统应至少包括一更(含更鞋)、二更(含洗手)、缓冲和人流走廊等。

　　物流通道应考虑污水净化分流的布局，有条件的可设置污水走廊。

　　2.洁净室的设计要求。

　　净化等级：洁净走廊。检查室。阳性菌室应为1万级;其他房间应为10万级。

　　气流组织:阳性菌室对走廊负压，走廊正压缓冲5Pa;阳性菌室全排气电气控制:外置控制开关;设置通信系统。

　　3.结构和要求。

　　无菌洁净室不宜位于底层，防潮、防霉、采光好，远离交通主干道、卫生间、污染区，面积不超过10m2，高度不超过2.4m，由两个缓冲室和操作室组成。操作室缓冲之间应有样品传送窗，进出操作室和缓冲室之间的门不应直接对齐。无菌室六面光滑平整，无缝隙，无灰尘，无灰尘，耐腐蚀，易清洗，墙面与地面。墙壁与天花板的连接处应为凹弧形，操作室不得安装下水道。

　　无菌室内照明灯应嵌入天花板内，采光面积大，光照分布均匀，光照度不低于300勒克斯。缓冲室和手术室应配备紫外线杀菌灯(2-25w/m3)，用于空气消毒。紫外线波长200-300nm的具有杀菌作用，其中265-266nm杀菌效果强，与DNA吸收光谱范围一致。其杀菌机制可能是在细菌细胞DNA中形成胸腺嘧啶双聚体，从而干扰细菌细胞DNA的复制，导致细菌变异死亡。紫外线杀菌灯距离1m以内杀菌效果好，每次开灯照射时间为30min。紫外线灯的辐射强度应定期检查，距离不应小于70μWcm-21m。缺点是穿透力弱，纸板可以阻碍光线的通过，不能穿透固体物体，只能用于表面消毒和一些不耐热或化学消毒剂的消毒。

　　4.温度。

　　无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外线杀菌灯的杀菌效果，因此温度控制在25±2℃，相对湿度为40-60%。手术室或净化工作台的清洁空气应对环境保持正压，不少于49Pa。

　　5.操作室。

　　空气除菌过滤层流装置和调温装置应安装在无菌室内。

　　洁净度要求：净化工作台洁净度100级，无菌室1万级。

　　操作室应准备乙醇灯(或气灯)、火柴、2%碘酊棉球、75%乙醇棉球、试管架、橡胶乳头、砂轮、记号笔、无菌剪刀、镊子、注射器等。微生物极限检查无菌室操作室还应有电子称(感觉0.1g，大称量300g)、电动均浆仪等。

　　6.缓冲间。

　　缓冲室内应有洗手盆、消毒液、无菌衣服、帽子、口罩、拖鞋等缓冲室内不得放置培养箱等杂物。

　　(二)使用洁净室。

　　1.实验开始前1小时启动风扇系统(空调系统)，空气消毒装置至少半小时关闭。

　　2.观察并确保洁净室的压差。

　　3.物品通过物流通道进入洁净室。

　　4.人员正确着装后，通过人流通道进入洁净室。

　　5.使用后，用消毒剂清洁工作台。实验人员在更衣室更换无菌工作服，然后离开清洁工作室。打开空气消毒装置，消毒至少半小时闭清洁工作室的控制开关。

　　(3)洁净室的清洁和维护。

　　1.洁净室的清洁和维护分为日常维护、定期维护和不合格维护。

　　2.日常维护由每次实验的实验人员进行，维护范围为洁净工作室和辅助洁净区，维护频率为每次实验后。

　　3.定期维护由实验室指定的专人进行，维护范围为所有清洁工作室，维护频率为每两周一次。

　　4.不合格的维护由实验人员进行，维护范围为所有不合格的洁净室，维护时间为不合格的。

　　(四)洁净室验证。

　　1.验证项目：

　　清洁度、微生物数、通风次数、静压差、照度、温度、相对湿度。

　　2.验证的技术要求。

　　验证项目10万级1万级100级。

　　温度(℃)18-2620-2420-24。

　　相对湿度(%)45-6545-6045-60。

　　换气次数(次/h)不少于15或25。

　　压差(pa)相对于室外:10级差的洁净室之间:

　　照度(Lx)主工作室≥300辅助工作室≥150。

　　悬浮粒数(粒/m3)≥0.5um35000035000≥5um2000020000。

　　5001005浮游菌数(个/m3)。

　　1031沉降菌(个/皿)。

　　3.建议验证周期每半年一次，验证次数也可根据洁净室的使用频率适当增加。

　　4.验证方法的清洁度和微生物数:GB/T16292~16294-1996，其他项目:参考JGJ71-90。

　　5.验证不符合项的处理。

　　当洁净度、微生物数、通风次数、静压差等指标不符合时，应停止使用洁净室。净化系统调整后，应重新验证，直至符合规定。

　　当温度、相对湿度、照度等指标不一致时，洁净室不需要停止使用，但应及时修复空调系统(或更换照明装置)，使其符合要求。